蔬菜農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)技術(shù)常見的問題
蔬菜農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)技術(shù)，具有簡(jiǎn)便、靈敏、快速、經(jīng)濟(jì)和對(duì)檢測(cè)人員技術(shù)水平要求低等特點(diǎn)，成為我國當(dāng)前檢測(cè)蔬菜高毒農(nóng)藥殘留比較普及的一種檢測(cè)方法，廣泛應(yīng)用于蔬菜生產(chǎn)基地、蔬菜大中型批發(fā)市場(chǎng)、各大超市以及各縣（市、區(qū)）檢測(cè)站，為提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量，保障公眾健康發(fā)揮了重大作用。但是在實(shí)際應(yīng)用過程中，該技術(shù)常常出現(xiàn)樣品空白值偏低、樣品吸光度值偏高、抑制率為負(fù)值以及假陰性和假陽性等問題，給有關(guān)人員和部門帶來很多不便。下面本人根據(jù)幾年來的工作經(jīng)驗(yàn)一些常見問題和大家共問探討，希望對(duì)從事此檢測(cè)工作的技術(shù)人員有所幫助。1檢測(cè)原理
蔬菜農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)酶抑制技術(shù)，是根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶的活性，造成神經(jīng)系統(tǒng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響神經(jīng)正常傳導(dǎo)，從而使動(dòng)物中毒致死這一原理，用于農(nóng)藥殘留的檢測(cè)中。如果蔬菜的提取液中不含有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥或農(nóng)藥殘留量較低，酶活性不被抑制，實(shí)驗(yàn)中加入的底物被酶水解或部分水解，水解產(chǎn)物再與加入的顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色；反之，不顯色或顏色變化很小。用農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀（分光光度計(jì)）測(cè)定吸光值隨時(shí)間變化，計(jì)算可得出抑制率，據(jù)此判定農(nóng)藥殘留情況。2藥品配制及樣品前期處理2.1藥品配制及保存藥品的配制包括提取液、酶、底物和顯色劑的配制。其中提取液的配制是最重要的，是其他試劑配制的稀釋劑。由于所用藥品純度的差別，加之實(shí)驗(yàn)溫、濕度對(duì)緩沖液pH值的影響，往往按標(biāo)準(zhǔn)配比配制出的提取液達(dá)不到規(guī)定值（pH=0.8）。所以我們建議在配制后應(yīng)該用pH計(jì)對(duì)提取液pH值加以校正。酶液、底物、顯色劑按要求配制一般不會(huì)有問題，但要控制好保存條件。酶液、底物、顯色劑處于溫度較高的環(huán)境中易變質(zhì)失效，尤其是在夏天。因此，配制藥液時(shí)可以采取分裝制（分成3～5個(gè)小瓶），即用即取，從而保證藥液質(zhì)量，避免藥品浪費(fèi)。酶是此檢測(cè)技術(shù)成功與否的關(guān)鍵。酶的種類、純度、活性、貯存及反應(yīng)時(shí)酶的濃度等都會(huì)對(duì)測(cè)試結(jié)果造成極大的影響。所以，我們對(duì)這些相關(guān)因素掌握或控制不好，分析的靈敏度、度和重現(xiàn)性將難以保證。2.2樣品前期處理取樣品時(shí)應(yīng)按蔬菜種類不同選擇適宜的部位。葉菜類去腐葉、枯葉、蕊葉，采集有代表性的不同植株的葉片；果菜豆菜類從表皮至果肉1～1.5厘米處取樣，果肉不要取的過多；含葉綠素和其他色素較高的蔬菜取樣時(shí)不要立即加液提取，否則容易被氧化，提取液顏色會(huì)逐漸加深，樣品本底吸光值造成人為因素升高。2.3培養(yǎng)樣品的制備選擇容量與培養(yǎng)量相似的培養(yǎng)管，這樣防止了微量的藥液在加入時(shí)過多的掛在培養(yǎng)管壁上，而難以完全進(jìn)入到培養(yǎng)液中，引起較大誤差。同時(shí)培養(yǎng)箱的溫度和培養(yǎng)時(shí)間要嚴(yán)格控制在37～38℃之間30分鐘。3檢測(cè)值常見的問題3.1空白值儀器操作首先要保證儀器有良好的穩(wěn)定性，比色杯無色差（成套的比色杯一般不會(huì)有色差，對(duì)不成套的必須驗(yàn)證）。其次對(duì)從培養(yǎng)箱取出樣品到上機(jī)這段時(shí)間的長(zhǎng)短要嚴(yán)格把握。用丁酰膽堿酯酶的樣品空白值隨時(shí)間變化較大，丁酰膽堿酯酶穩(wěn)定性較差、活性較高，加入底物后反應(yīng)速度快，所以應(yīng)盡量縮短操作時(shí)間，否則空白值快速減小而達(dá)不到要求；與此相反，用乙酰膽堿酯酶的樣品受操作時(shí)間長(zhǎng)短的影響不大，操作時(shí)間不必過于要求。不同的酶在不同型號(hào)儀器、檢測(cè)條件的不同和酶化學(xué)性質(zhì)上的差異，樣品空白值也是不同的。3.2吸光值樣品吸光值偏高是檢測(cè)中常見的問題之一。酶活性降低、樣品本底顏色深和反應(yīng)中化學(xué)、物理干擾是其產(chǎn)生的根本原因。酶的失效引起其本身顏色的加深（由乳白色變?yōu)辄S色），樣品本底顏色較深，以及提取液中因含有樣品組織液形成膠體溶液、乳濁液或懸浮液等使透過光被額外的吸收或被散色，透光率減小，在吸光度上表現(xiàn)為值的增大。3.3抑制率檢測(cè)結(jié)果中偶爾會(huì)出現(xiàn)抑制率為負(fù)值，當(dāng)個(gè)別樣品有較小的負(fù)值誤差（-10%以下），這是在允許范圍之內(nèi)的。它主要是由操作誤差所導(dǎo)致的。酶分解底物，分解物再與顯色劑結(jié)合的過程非�？�，假如操作者不熟練會(huì)產(chǎn)生這樣的人為誤差，導(dǎo)致抑制率為負(fù)值。隨著操作者操作水平的提高，這是完全可以避免的。3.4假陽性與假陰性假陽性是由于酶活性降低或失活，導(dǎo)致其在底物中不起作用，底物不能被水解，無法與顯色劑結(jié)合顯色造成的。其結(jié)果似乎與提取液中存在農(nóng)藥，酶的活性被農(nóng)藥抑制類似。假陰性是因?yàn)槟撤N農(nóng)藥對(duì)某種酶抑制作用很小或無作用而產(chǎn)生的，表現(xiàn)出無農(nóng)藥的假象。除此，在反應(yīng)過程中化學(xué)干擾都可能導(dǎo)致假陽性、假陰性問題的發(fā)生。我們認(rèn)為檢測(cè)人員只能通過選擇有較好活性、較強(qiáng)敏感性的酶來盡量減少此類問題的出現(xiàn)。
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